MTB (MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS) ĐỊNH DANH TRCReady

MTB (MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS) ĐỊNH DANH TRCReady

MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

Mục đích      

Quy trình này mô tả các bước kỹ thuật xét nghiệm phát hiện Mycobacterium tuberculosis trên hệ thống TRCReady-80.

Nguyên lý

Kỹ thuật TRCReady MTB nhằm khuếch đại và phát hiện trình tự đích dựa trên sự kết hợp của phản ứng phiên mã ngược và phiên mã. Kỹ thuật TRC khuếch đại và phát hiện ARN đích trong cùng một bước thông qua sự kết hợp phản ứng khuếch đại đẳng nhiệt ARN và đầu dò phát huỳnh quang hoạt động theo hình thức cài xen (Intercalation activating fluorescence- INAF).  TRCReady MTB khuếch đại và phát hiện ARN 16S. Đồng thời, kit cũng chứa chứng nội để phát hiện chất ức chế phản ứng khuếch đại ARN. Phản ứng khuếch đại được phát hiện trong thời gian thực bằng cách đo mật độ huỳnh quang phát ra do sự liên kết của trình tự ARN đích với probe INAF. Các phản ứng được thực hiện ở điều kiện đẳng nhiệt 46°C. 

CHUẨN BỊ

Người thực hiện:

Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương):

Trang thiết bị

Máy TRCReady-80

Máy tính được cài sẵn phần mềm TRCReady-80 

Bộ lưu điện

Đồng hồ bấm giờ

Máy ly tâm tuýp 50 ml 

Tủ an toàn sinh học cấp 2 

Máy vortex 

Máy ủ nhiệt khô (với giới hạn nhiệt độ >80^oC)

Máy ly tâm tuýp 1,5 ml (với lực ly tâm đạt 10000 g)

Máy spindown (để ly tâm nhẹ, không bắt buộc)

Máy in (không bắt buộc)

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

Bệnh phẩm

Hầu hết các loại bệnh phẩm từ các tổn thương nghi lao. Ngoài ra, có thể dùng chủng nuôi cấy dương tính.

Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

Xử lý bệnh phẩm: Khử nhiễm bệnh phẩm (nếu cần)

Tiến hành kỹ thuật

Phân giải (lysis)

Chuẩn bị hóa chất cho bước tách chiết và phát hiện

Chạy phản ứng

Xem kết quả

Diễn giải và báo cáo kết quả 

Kết quả của mẫu và chứng được phần mềm thể hiện ở ba cột: Judgement, Assay flag và Judgement flag.Kết quả của mẫu được phiên giải như sau:

Kết quả của chứng được phiên giải như sau:

SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Các trường hợp không phù hợp của chứng và cách xử lý

Chứng dương có kết quả Invalid#1, thực hiện các bước kiểm tra như sau:

Chứng âm có kết quả Invalid#1, Invalid#2 thực hiện bước kiểm tra sau:

*Các thông báo lỗi khác: Tham khảo hướng dẫn của nhà sản xuất