ĐỊNH DANH VI SINH VẬT BẰNG KỸ THUẬT LỒNG TÁC NHÂN

ĐỊNH DANH VI SINH VẬT BẰNG KỸ THUẬT LỒNG TÁC NHÂN

MỤC ĐÍCH VÀ NGUYÊN LÝ

Mục đích

Xác định sự có mặt của một số căn nguyên vi sinh vật thường gặp trực tiếp từ các bệnh phẩm lâm sàng.

Nguyên lý

Dựa trên nguyên lý của kỹ thuật PCR lồng đa mồi.

CHUẨN BỊ

Người thực hiện

Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Phương tiện, hóa chất (Ví dụ hoặc tương đương)

Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.

Trang thiết bị

Tủ an toàn sinh học cấp 2

Hệ thống FilmArray phần mềm 

FilmArray Pouch Loading Station

Tủ lạnh 2⁰C - 8⁰C

Tủ âm sâu (-20⁰C hoặc -70⁰C)

Micropipette

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

STT		Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao		Đơn vị
1		Bông		kg
2		Cồn		ml
3		Bơm kim tiêm		Cái
4		Panh		Cái
5		Khay đựng bệnh phẩm		Cái
6		Hộp vận chuyển bệnh phẩm		Test
	7		Tube đựng bệnh phẩm		Cái
	8		Găng không có bột		Cái
	9		Sinh phẩm chẩn đoán		Test
	10		Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng và kiểm tra chất lượng		Test
	11		Môi trường vận chuyển mẫu		Ống
	12		Đầu côn 10 µl có lọc		Cái
	13		Đầu côn 30 µl		Cái
	14		Đầu côn 200 µl có lọc		Cái
	15		Đầu côn 1 ml có lọc		Cái
	16		Giấy thấm		Cuộn
	17		Giấy xét nghiệm		Tờ
	18		Sổ lưu kết quả xét nghiệm		Tờ
	19		Bút viết kính		Cái
	20		Bút bi		Cái
	21		Mũ		Cái
	22		Khẩu trang		Cái
	23		Găng tay		Đôi
	24		Găng tay xử lý dụng cụ		Đôi
	25		Quần áo bảo hộ		Bộ
	26		Dung dịch xà phòng rửa tay		ml
	27		Cồn sát trùng tay nhanh		ml
	28		Dung dịch khử trùng		ml
	29		Khăn lau tay		cái
	30		Ngoại kiểm (EQAS) (nếu có)*

Ghi chú: 

Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 3 lần/1 năm).

Bệnh phẩm

Phân, dịch tỵ hầu, dịch não tu .

Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

Lấy bệnh phẩm

Tiến hành kỹ thuật

Bước 1: Chuẩn bị túi hóa chất

Cho túi hóa chất vào trong trạm chuẩn bị mẫu

Đặt lọ để tiêm mẫu bệnh phẩm (màu đỏ) vào giếng màu đỏ

Đặt lọ chứa dung dịch hòa tan hóa chất (màu xanh) vào giếng màu xanh

Bước 2: Hòa tan hóa chất

Xoáy để mặ lọ chứa dung dịch hòa tan hóa chất

Tiêm vào ống chứa dịch hòa tan của túi hóa chất

Đợi tới khi hóa chất hòa tan trong tất cả các ống thì rút kim ra trả về lọ đựng dung dịch ban đầu.

Bước 3: Trộn mẫu bệnh phẩm vào túi hóa chất

Thêm toàn bộ ống dung dịch đệm vào lọ để tiêm mẫu

Dùng pipet chuyển mẫu bệnh phẩm vào trong lọ này

Nắp chặt, bỏ ra khỏi giếng và trộn bằng cách lắc lên 3 lần

Đặt lại vị trí giếng màu đỏ

Bước 4: Nạp mẫu bệnh phẩm

Xoay vòng mở nắp kim của lọ tiêm mẫu

Tiêm toàn bộ lọ vào giếng chuẩn đầu tiên

Đẩy mạnh toàn bộ dung dịch vào trong túi hóa chất

Bước 5: Bắt đầu chạy FilmArray

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Phần mềm tự động mở bản báo cáo kết quả khi xét nghiệm hoàn tất.

NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Trong trường hợp không có sản phẩm PCR, cần phải kiểm tra lại quá trình tách chiết RNA tổng số, chất lượng primers và master mix, và thực hiện lại toàn bộ xét nghiệm.